Фитотерапия
Запись на прием:
+7(916) 501-56-09
Бесплатный звонок по России: 8 800 775-65-02

Аспекты технологической функционализации лектинов

Арунас Савицкас, Юрга Бернатонене, Гайлуте Дракшене, Нийоле Савицкене

Kафедра Технологии лекарств и социальной фармации фармацевтического факультетa при Медицинской академии Литовского университетa наук здоровья, А. Мицкявичаус, Каунас.

Kафедра фармакoгнозии фармацевтического факультетa при Медицинской академии Литовского университетa наук здоровья, А. Мицкявичаус, Каунас.

Резюме

Лектины – это гликопротеиды, которые можно найти в различных растениях и которые отличаются антипролиферативным, противораковым, иммуномудуляционным, противогрибковым и противовирусным действием. В последнее время во всём мире проходят интенсивные работы по выделению лектинов из различных растений и их характеристике. Цель этой работы – оценка технологических свойств лектинов, выделенных из экстрактов крапивы, шалфея и чабреца. Из экстрактов листьев крапивы двудомной (Urtica dioica L.) , травы тимьяна обыкновенного (Thymus vulgaris L.) и листьев лечебного шалфея (Salvia officinalis L.) были выделены богатые лектинами белковые фракции. Изучались технологические свойства лектинов. Установлено, что лектиновый порошок непригоден для наполнения капсул, свойства его сыпучести были улучшены с помощью вспомогательных веществ и влажного гранулирования. Данные готовых капсул соответсвуют требованиям установленым Европейской фармакопеи.

Введение

Растительные лектины это класс белков неимунного происхождения, связывающих углеводы, которые обнаружены в разных видах растений [Goldstein, I.J. ir kt., 1980, Peumans, W.J. ir kt., 2001]. Они могут конкретно распознать и присоединиться к разным структурам сахаров и таким образом вызывают важные клеточные процессы [Sharon,N., 2007]. Лектины глюкопротеины могут распознать и отличить клетки злокачественных опухолей, им характерны противогрибковые и противовирусные свойства, способность вызвать аглютинацию [Valentiner, U. ir kt., 2003]. Была замечена способность лектинов инициировать апоптоз раковых клеток [Liu, B. ir kt., 2009]. В течении последних нескольких лет были очищены и детально охарактеризированы сотни растительных лектинов, основываясь на их биохимических свойствах, специфичности связывания углеводов и биологических функциях [Edelman,G.M. ir kt., 1972, Van Damme, E.J.M. ir kt., 1991]. По общим структурам растительных лектинов их можно разделить на подразделы: меролектины, хололектины, химеролектины и суперлектины [Van Damme, E.J. ir kt., 1998]. Кроме того, по свойству подключения сахаров растительные лектины класифицируются на полиспецифичных и моноспецифичных, которые способны взаимодействовать с одним или несколькими сахарами, такими как: галактоза, маноза, в составе которых есть гликаны, а также глюкоза и т. п. .[Vijayan,M. ir kt., 1999,Barre,A. ir kt., 2001]. Чаще всего лектины выделяют из семян, корней и корневищ [Peumans, W.J. ir kt., 2001]. Из корневищ крапивы двудомной был выделен лектин-аглютинин, связывающий N-ацетилглюкозамин ( 8,5 kDa) мономерный белок, в составе имеющий глицин, цистеин и триптофан [Chapot, M.P. ir kt., 1986]. Данные об изучении семян или корней тимьяна найдены не были. Также не проводились исследования листьев двудомной крапивы (Urtica dioica L.) и лечебного шалфея (Salvia officinalis L.), и травы простого тимьяна (Thymus vulgaris L.). Растительные лектины – это биологически активные соединения, и даже малое их количество может быть использовано для производства препаратов. Поэтому одна из задач работы была выделить лектины из листьев крапивы двудомной (Urtica dioica L.), травы тимьяна (Thymus vulgaris L.) и листьев и экстракта лечебного шалфея (Salvia officinalis L.), а также провести количественный и качественный анализ этих соединений. Вместе с научными работниками лаборатории генетики при Институте Сaдоводства и огородничества была подготовлена методика качественного и количественного анализа лектинов.

Указанные в литературе данные о противораковом действии лектинов (рицин Б, конкавалин А и лектинов выделенных из фасоли) указывают на то, что запрограмированная смерть раковых клеток – апоптоз, инициируется различными механизмами. В механизмах инициации апоптоза важное место занимают митохондрии, основная функция которых – синтезировать высокоэнергетические соединения в процессе оксидационной фосфорилизации и обеспечить клетку энергией, необходимой для поддержания процессов жизнедеятельности. Энергетическое состояние важно и для смерти клетки: если повреждена структура и функция митохондрии, то скорость оксидационной фосфорилизации ниже и меньше количество создаваемого АТФ – клетка сможет умереть только путём некроза; если митохондрия неповреждена, ресурсы АТФ не израсходованы – в таком случае клетка умирает путём апоптоза. Но митохондрии важны не только для синтеза АТФ, но и как один из основных генераторов свободных кислородных радикалов в клетке. Известно, что апоптозную смерть клеток может инициировать повышенная концентрация РОС. Данные экспериментов некоторых учёных (Zhang Q, 2002) указывают на то, что генерация РОС возрастает в результате влияния лектинов. Для того, чтобы выяснить механизмы деятельности изучаемых нами веществ, было актуально оценить их влияние на структуру митохондрий, активность оксидационной фосфорилизации и способность генерировать РОС.

МЕТОДЫ

Влажное гранулирование смеси сухих растительных экстрактов, лектинов и вспомогательных веществ.

Готовая масса состоит из 49,4 проц. экстракта сухих веществ в соотношении тимьян:крапива:шалфей (6:2:2) и 48,6 проц., Просолв HD90были смешаны в грануляторе и увлажены растворами. Использовались такие увлажняющие растворы: 0,5-4 проц. етаноловый раствор повидона; 0,5 проц. етаноловый раствор экстракта тимьяна ; 0,5 проц .раствор эстракта крапивы; 1 проц этаноловый раствор эстракта шалфея Получены гранулы разпределены и высушены при температуре 40 0C пока убыток от высыхания не составит 3-4 проц. Высушенные гранулы перетираются через сито диаметром 1мм и ещё раз оцениватеся убыток от высыхания.

Производство капсул

Использовалась машинка для капсулирования с ручным наполнением, которая состоит из 60 гнёзд, предназначеных для капсул одинакового размера. Капсула открывается и бoльшая её часть (тело) размещается по гнёздам. Наполнитель капсул разпределяется на пластиковой тарелочке с открытыми капсулами. Наполнители капсул укрепляются слегка нажав предназначенной для того лопаткой и надеваются шапочки капсул.

Определение динамической вязкости увлажняющих растворов

Динамическая вязкость каждого увлажняющего раствора определялась при комнатной температуре (25±2 ?C), с помощью ротационного вискозиметра.

Определение фракционного состава капсул

Фракционный состав частиц определён согласно Eur. Ph. 01/2008:20938.

Микроскопический анализ порошка и гранул

Величина порошка и гранул смеси сухих экстрактов оценивалась с помощью оптического микроскопа (Motic Instruments, Inc., Гонконг) .

Анализ сыпучести порошка и гранул

Определена согласно Eur. Ph. 01/2005:20242.

Определение убытка высыхания

Убыток высыхания порошков, гранул и пеллет был определён с помощью влагомера KERN MLS, Германия. 2 г (точность до 0,001г) исследуемого образца высушивалось при температуре 100-105 ?C до постоянной массы. Результат – убыток массы при сушке в процентах, n=5.

Определение однородности массы капсул

Согласно Eur. Ph. 01/2008:20905.

Определение времени распада капсул

Время распада капсул определено согласно Eur. Ph. 01/2005:20901 и с помощью теста распада таблеток и капсул.

Тест на растворимость лекарств твёрдой формы

Применялся тест для определения скорости общего высвобождения феноловых соединений из капсул. Для этой цели использовалось корзиночное устройство. Анализ проведён согласно Eur. Ph. 01/2005:20903, тест на растворимость лекарств твёрдой формы.

Метод лиофилизации

Для лиофилизации использовался лиофилизатор Alpha 1-2 (Германия), в котором одновременно лиофилизируются 8 образцов. Образцы высушиваемого продукта разливаются на 8 флаконов по 20 мл. Образцы постепенно замораживаются по 0,2-1,0 ?C/мин до -40 ?C, а в конце лиофилизации отогреваются до температуры 30 ?C. Остаточная влажность лиофилизированного продуката 1-2 проц., продолжительность процесса 18 часов.

Сушка в распылительной сушилке

В распылительных сушилках жидкость диспергируется механически, диаметр распыляемых капель достигает 10-50 ?м. Со всех сторон капли подвергаются горячему воздуху, в течении нескольких секунд теряют влагу и высыхают. Благодаря короткому контаку с горячим воздухом и интенсивному испарению, сушка в распылительных сушилках проходит быстро, температура обрабатываемого продукта достигает 40-60 ?C, продукт не нуждается в предварительном измельчении. Образцы высушиваемого продукта сушились в распылительной сушилке “Buchi 190” (Швейцария). Перед сушкой продукт не сгущался. Подходящий режим работы сушилки был подобран изменяя температуру нагрева в камере сушения и скорость распыления продукта: температура воздуха в месте нагрева камеры сушения 165 ?C, температура на выходе 105 ?C, скорость распыления 8 ml/min.

Статистическая оценка данных

Статистический анализ проведён с помощью програмного пакета SPSS 19 (IBM, США).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Технологические свойства лектинов важны при изготовлении таких лекарственных форм как капсулы и таблетки. Сыпучесть порошка оценивалась согласно индексу Карр (ИК), коэффициэнту Хауснера (КХ), индексу сыпучести (ИС), свободной и уплотнённой насыпной массы и насыпному углу (НУ). В литературе указано, что ИК это вспомогательная единица измерения свободной насыпной массы и величины частиц и зависит от КХ. В 12 таблице приведены значения ИК, КХ и УС, характеризующие сыпучесть [Mohamed et al., 2007; Shah et al., 2008].

Таб.1 Характеристика порошка лектинов, полученного в распылительной сушилке (А) и в процессе лиофилизации (Б)

Экстракт из которого выделен лектин Индекс Карр (ИК), проц. Коэффициент Хауснера (КХ)

Насыпной угол,(НУ)0

F Б A

Б

A

Б

Крапивы 28 39 1.37 1.62 51 66
Тимьяна 42 37 1.65 1.66 69 69
Шалфея 30 40 1.39 1.64 53 70

Опыты изучения сыпучести проведённые с порошком указали, что они не подходят для разливания по капсулам или спрессовывать в таблетки. В литературе указано, что «отличные» результаты достигаются тогда, когда ИК равен 1-10, КХ – 1,00-1,11 [European Pharmac., 2007]. Основываясь на результатах исследования было установлено, что сыпучесть порошка лектинов была от «плохой» до «очень очень плохой»: ИК был между 28,00-42,00 проц., а КХ от 1,37 до 1,66. Изучив характеристики порошка лектинов, полученного в процессе лиофилизации (таб.1) можно оценить как «очень очень плохие». Это может быть связано с тем, что порошок полученный в процессе лиофилизации впитывает очень много влаги, поэтому в последующих исследованиях такой порошок не использовался. Свойства порошка лектинов, полученного путём сушки лектинового раствора в распылительной сушилке также не были подходящими для прямого всыпания в капсулы. В дальнейшем ходе работы исследовались возможные вспомогательные вещества для оптимизации физических технологических свойств лектинов.

Для улучшения сыпучести порошков растительных экстрактов часто используются такие вещества: Prosolv HD90, в состав которого входит целлюлоза (МКЦ) и колойдный диоксид силиция (СДО) [Marczynski et al., 2007], манитол, колойдный СДО и др. [Javadzadeh et al., 2009]. Принимая это во внимание, для улучшения сыпучести смеси порошков растительных экстрактов были использованы разные наполнители: Prosolv HD90, манитол+колойдная смесь СДО, МКЦ+колойдная смесь СДО.

Обобщив фармакологические особенности эсктрактов тимьяна, шалфея и крапивы, для дальнейших исследований была выбрана смесь экстрактов тимьяна, шалфея и крапивы в соотношении 6:2:2 и порошок лектинов, полученный в распылительной сушилке из исследуемых эстрактов.

Ранние эксперименты показали, что вспомогательные вещества улучшили сыпучесть и насыпную массу порошка лектинов. Поэтому целенаправленно было исследовать и точно определить количество вспомогательных веществ, позволяющих приготовить массу пригодную для капсулирования (таб.2).

Таб.2 Количество сухих эстрактов и порошка лектинов в капсуле

Название ингредиента Количество, проц.
Экстракт шалфея 9,88
Экстракт крапивы 9,88
Экстракт тимьяна 29,64
Порошок лектинов шалфея 0,4
Порошок лектинов крапивы 0,4
Порошок лектинов тимьяна 1,2

Измерения свободной и уплотнённой насыпной массы показали, что вспомогательные вещества улучшили сыпучесть смеси сухих растительных экстрактов и порошка лектинов до «удовлетворительного»: ИК понизился от 7 проц. (добавив МКЦ и колойдного СДО) до 17 проц. (добавив Prosolv HD90). (таб.3).

Таб.3 Параметры сыпучести смеси сухих растительных экстрактов, порошка лектинов и вспомогательных веществ (средний показатель ±SN, n=5)

Исследуемая смесь Индекс Карр (ИК) проц. Коэффициент Хауснера (КХ) Насыпной угол (НУ), 0 Индекс сыпучести, г/с
Экстракт шалфея 10,11±1,90 1,11±0,04 >64 0,50±0
Экстракт тимьяна 20,96±0,44 1,27±0,01 47±0,7 1,30±0,06
Экстракт крапивы 29,38±1,63 1,28±0,03 33±0,58 2,72±0,04
Смесь экстрактов 18,47±0,47 1,23±0,02 38±0,21 1,54±0,06
Смесь экстрактов и порошка лектинов 18,36±0,24 1,24±0,01 38±0,11 1,44±0,07
Смесь экстрактов и Prosolv HD90 23,26±4,16 1,16±0,07 34±0,30 3,75±0
Смесь экстрактов и лектинов с Prosolv HD90 23,47±2,11 1,15±0,04 33±0,13 3,69±0,06
Смесь экстрактов с МКЦ+СДО 26,20±0 1,44±0,08 39±0,04 2,20±0
Смесь экстрактов и лектинов с МКЦ+СДО 27,30±0,04 1,43±0,09 41±0,02 2,24±0,04
Смесь экстрактов с манитол+СДО 23,00±2,21 1,22±0,06 34±0,50 3,14±0,12
Смесь экстрактов и лектинов с манитол+СДО 23,05±1,11 1,22±0,01 34±0,07 3,11±0,09

Исследования ИС показали, что между порошками разных сухих растительных экстрактов была значительная разница. Сыпучесть экстракта шалфея была статистически достоверно (p<0,05) ниже по сравнению с экстрактами тимьяна и крапивы. Между тем сыпучесть смеси экстрактов (тимьяна, крапивы и шалфея) была в 1,77 раз ниже (p<0,05), чем экстракта крапивы. На такие результаты исследования сыпучести смеси экстрактов повлияла плохая сыпучесть экстракта крапивы. Данные исследования сыпучести смеси сухих экстрактов и порошка лектинов незначительно отличались от результатов исследования только смеси сухих экстрактов. Добавив вспомогательные вещества данные БИ смеси сухих экстрактов и порошка лектинов повысились в 2,18 раза (манитол+колойдный СДО), в 1,56 раз (МКЦ+колойдный СД) и в 2,56 раз (Prosolv HD90) по сравнению с сыпучестью растительных экстрактов (таб.3).

Сыпучесть порошка характеризует и насыпной угол. Основываясь на том, что НУ тимьяна был «очень очень плохой», т.е. более 640 (таб.3). НУ смеси растительных экстрактов и порошка лектинов с вспомогательными веществами понизилось на 7-13 проц., по сравнению с данными смеси растительных экстрактов и порошка лектинов без вспомогательных веществ и может быть оценён как «хороший». Также в ходе этих исследований было замечено, что порошок смеси сухих экстрактов тимьяна, шалфея и крапивы склонен распыляться. Вспомогательные вещества – Prosolv HD90, манитол+колойдный СДО и МКЦ+колойдный СДО уменьшили распыление, улучшили сыпучесть, но оценивая ИК, КХ и НУ свободной и уплотнённой массы смесь не отличалась «отличной» сыпучестью.

Полученные результаты указывают на статистически достоверную (p<0,014) корреляцию (p<0,014) между ИС и ИК смеси сухих экстрактов и порошка лектинов с использованием вспомогательных веществ и без.

Результаты исследования показали, что для того, чтобы порошок смеси растительных экстрактов и порошка лектинов был пригоден для насыпания в капсулы недостаточно добавить вспомогательные вещества.

В последующих экспериментах исследовалось влияние увлажняющего раствора на технологические свойства гранул.

Влияние увлажняющего раствора на технологические свойства гранул

Происхождение увлажняющего раствора (водный, этаноловый раствор) имеет влияние на технологические свойства гранул. Сухие растительные экстракты восприимчивы переменам влажности, т.к. легко может произойти гидролиз и распад активных веществ [ Podczeck et al., 2004]. В виде увлажняющих растворов были подобраны растворы разной концентрации и растворимых веществ.

В ходе исследованих установлено, что в процессе гранулирования при увеличении концентрации этанола в растворе следует накапать большее количество увлажняющего раствора, независимо от растворённого вещества. Установлено, что в процессе гранулирования между концентрацией этанола в растворе и количеством накапанного раствора статистически достоверная (p<0,001) корреляция (r=0,794) (данные не предосталены).

Чаще всего для влажного гранулирования используются тоько этаноловые и/или этаноловые растворы повидона. В ходе этого исследования использовались увлажняющие растворы этанола (70 проц. B/B, 80 проц. B/B и 96 проц. B/B) и этаноловый раствор повидона.

Таб.4 Состав увлажняющего раствора и визуальная оценка гранул*

Растворённое вещество Проц. Этанол проц. V/V Количество накапанного раствора, мл/100г Визуальная оценка гранул
1-3 Экстракт шалфея 3 70 11, 14, 15 Переувлажнённые агломераты
4 Экстракт шалфея 1 70 21 Гранулы
5 Экстракт шалфея 1 70 20 Гранулы
6 Экстракт шалфея 1 70 22 Гранулы, есть переувлажнённые
7 Экстракт крапивы 0,5 50 12 Гранулые, есть пыль
8 Экстракт крапивы 0,5 50 14 Гранулы
9 Экстракт крапивы 0,5 50 15 Гранулы
10 Экстракт тимьяна 1 40 12 Гранулы, есть пыль
11 Экстракт тимьяна 1 40 14 Гранулы
12 Экстракт тимьяна 1 40 14 Гранулы
13 Смесь экстрактов (6:2:2) 11 Гранулы, есть неувлажнённые 14 Смесь экстрактов (6:2:2)
13 Гранулы 15 Смесь экстрактов (6:2:2) 13 Гранулы
16-18 Повидон 0,5 70 22, 25, 28 Неувлажнённая масса
19-21 Повидон 1 70 22, 25, 28 Неувлажнённая масса
22-24 Повидон 2 70 21, 22, 24 Неувлажнённая масса
25-27 Повидон 3 70 19, 20, 21 Неувлажнённая масса, хрупкие гранулы
28 Повидон 4 70 15 Хрупкие гранулы
29 Повидон 4 70 16 Гранулы
30 Повидон 4 70 16 Гранулы
31-33 70 22, 23, 25 Хрупкие гранулы
34-36 80 25, 26, 28 Хрупкие гранулы
37 96 26, 29, 30 Гранулирование не произошло

*Выделены образцы, с которыми проведены дальнейшие исследования

Полученные результыты показали, что каждый увлажняющий раствор по разному влияет на сыпучесть порошка (гранул), однако во всех гранулированных порошках сыпучесть улучшилась от 1,7 до 2 раз по сравнению со смесью сухих растительных экстрактов и порошка лектинов+Prosolv HD90 (таб.4).

Оценивая гранулы, при изготовлений которых как увлажняющий раствор использовались этаноловые растворы экстрактов шалфея, крапивы или повидона, была отмечена «отличная» сыпучесть: ИК был 1,3-7 проц., КХ был 1,01-1,17, определён НУ <300. Сыпучесть гранул, изготовленных путём гранулирования с использованием этаноловых растворов смеси сухого экстракта тимьяна и растительных экстрактов была «средней». Эти исследования показали, что статистически достоверно (p<0,05) улучшилась сыпучесть порошка смеси гранулированных сухих растительных экстрактов.

При гранулировании смеси сухих экстрактов и порошка лектинов раствором близким по происхождению увлажняющим раствором – 4 проц. этаноловым раствором сухой крапивы и химического повидона, сыпучесть была «отличной».

Полученные результаты указывают на то, что влажное гранулирование улучшило сыпучесть порошка сухих растительных экстрактов, влияло на уплотнение порошка, понизило склонность порошка к агрегации (таб.5).

Таб.5 влияние увлажняющего раствора на технологические свойства гранул, (средний показатель ±SN, n=3-4)

Увлажняющий раствор Свободная насыпная масса, г/моль Уплотнённая насыпная масса, г/моль Индекс Карр (ИК), проц. Коэффициент Хауснера (КХ) Насыпной угол (НУ) ° Сыпучесть г/с
0,5 проц.этаноловый раствор сухого экстракта шалфея 0,44±0,02 0,46±0,04 4,0±0,02 1,04±0,01 26±0,2 7,78±0,08
0,5 проц. Этаноловый раствор сухого экстракта крапивы 0,47±0,05 0,47±0,08 1,3±0,03 1,01±0,02 25±0,1 7,78±0,04
0,5 проц. Этаноловый раствор сухого экстракта тимьяна 0,44±0,04 0,51±0,06 12,7±0,05 1,14±0,04 35±2,1 6,75±0,20
Этаноловый раствор смеси сухих экстрактов 0,41±0,04 0,48±0,05 14,6±0,05 1,17±0,08 32±1,4 7,41±0,12
4 проц. Этаноловый раствор повидона 0,41±0,03 0,45±0,08 7,0±0,07 1,1±0,09 27±1,3 7,45±0,11

На влажное гранулирование влияет не только происхождение увлажняющего раствора (химического или натурального происхождения), но и его вязкость [Giry et al., 2006]. В ходе исследований установлена достоверная разница (p<0,001) между вязкостью растворов используемых для гранулирования, не определена разница между растворами, в которых растворимым веществом были сухие экстракты шалфея и крапивы (данные не предоставлены).

Производство капсул и оценка качества

Так как гранулы, полученные путём гранулирования с использованием 0,5 проц. этанолового раствора сухого экстракта крапивы были наименее различны по размеру, а смесь экстрактов и порошка лектинов с Prosolv HD90 отличалась лучшими параметрами сыпучести, капсулы 1 размера были наполнены гранулами этого состава. Были изготовлены 3 серии капсул по 60 единиц. Каждую капсулу наполняли 500мг наполнителя.

Для того, чтобы подтвердить качество капсул, был проведёны анализ однородности массы капсул, определено время распада капсул и тест растворимости капсул (таб.6).

Для определения однородности массы капсул в случайном порядке из каждой серии выбирается 20 капсул и вычисляется средняя масса каждой из них. Результаты показывают, что капсулы соответсвуют требованиям. При том, что средняя масса капсул равна 300 мг разрешимое отклонение массы равно 7,5 проц., в нашем случае отклонение 2,93 проц., время распада капсул до 15 минут.

Таб. 6 Качественные данные капсул

Качественные данные Номер серии
1 2 3
Масса,мг
(X±SD; n=20)
499±15 501±13 499±16
Время распада, мин.
(X±SD n=3)
12±0,5 14±0,5 12±0,5

Выделение активных веществ оценивали по общему количеству растворившихся феноловых соединений. Исследование проводилось в дистиллированной воде 37±2?C и 0,1М растворе соляной кислоты 37±2?C. Кинетика выделения общего количества феноловых соединений из капсул 1 и 2 серий показана на 1 и 2 иллюстрации.

Ил. 1 Количество растворённых феноловых соединений капсул 1 серии в кислотной и водяной среде

Ил.2 Количество растворённых феноловых соединений капсул 2 серии в кислотной и водяной среде

Во всех случаях в течении 45 мин., выделяется 75 проц. и более феноловых соединений. Сравнивая выделение феноловых соединений в разных условиях, мы определили, что в кислотной среде из капсул всех серий выделилось на 4 проц., больше феноловых соединений чем в водяной среде, но эта разница не является статистически достоверной. Результаты исследований указывают на то, что технологические данные изготовленных капсул соответствуют качественным требованиям Ph.Eur.

Выводы

1. Исследования сыпучести порошка лектинов показали, что они непригодны для наполнения капсул. Результаты исследования указывают на то, что сыпучесть порошка лектинов была от «плохой» до «очень очень плохой»: Индекс Карр (ИК) был 28-42 проц., а коэффициент Хауснера (КХ) от 1,37 до 1,66, поэтому для оптимизирования физико-технологических свойств лектинового порошка в смесь обязательно следует добавлять вспомогательные вещества.

2. Измерения свободной и уплотнённой насыпной массы показали, что вспомогательные вещества улучшили сыпучесть смеси сухих екстрактов тимьяна, крапивы, шалфея и лектинового порошка до «удовлетворительной»: ИК понизился на отметку от 7 проц. (добавив МКЦ и колойдный СДО) до 17 проц. (добавив Prosold HD90). Полученные результаты показывают статистичеси достоверную (p<0,014) корреляцию (r = 0,867) между Индексом сыпучести (ИС) и индексом Карр (ИК) смеси сухих экстрактов тимьяна, шалфея, крапивы и лектинового порошка с добавлением вспомогательных веществ и без них.

3. В ходе исследований установлено, что влажное гранулирование улучшило сыпучесть наполнителя капсул, состоящего из смеси сухих экстрактов тимьяна, крапивы, шалфея и лектинового порошка с использованием вспомогательных веществ, также уплотнило порошок, уменьшило свойство порошка агрегироваться. Гранулы, полученные путём гранулирования с использованием этанолового раствора сухого экстракта крапивы были наименее различны по размеру т.е. в 6,2 раза меньше по сравнению с порошком, гранулированным этаноловым раствором повидона.

4. Тесты однородности массы, растворимости и распада капсул показали, что технологические данные приготовленых капсул соответствуют требованиям Ph.Eur. Отклонение массы готовых капсул равно 2,93 проц., время распада до 15 минут, в течении 45 минут выделяется от 75 проц. и более всех феноловых соединений.

Благодарность

Хотели-бы выразить благодарность Научному совету Литвы за поддержку выполняя задачи проекта TAB LB 14/2013 «Исследование и разработка способов использования новых полипептидов семейства лектинов растительного происхождения в качестве потенциальных иммуномодуляторов и цитостатиков».

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

LITERATURA

A. Barre, Y. Bourne, E.J.M. Van Damme, W.J. Peumans, P. Rouge, Mannose-binding plant lectins: different structural scaffolds for a common sugar-recognition process, Biochimie (2001) 83: 645– 651.

A. Kaur, S.S. Kamboj, J. Singh, A. K. Saxena, V. Dhuna. Isolation of a Novel N-acetyl-D -lactosamine Specific Lectin from Alocasia cucullata (Schott.). Biotechnol Lett. 2005; 27 (22):1815-20.

Anita Gupta and R.S. Sandhu (1997) A new high molecular weight aggliutinin from garlic (Allium sativum).

B. Liu, M.W. Min, J.K. Bao, Induction of apoptosis by concanavalin A and its molecular mechanisms in cancer cells. Autophagy, 2009. 5: 432–433.

Chapot M. P, Peumans W.J, Strosberg A.D (1986). Extensive homologies between lectins from non-leguminous plants. FEBS Lett. 195 (1,2): 231 – 234.

E.J. Van Damme, W.J. Peumans, A. Barre, P. Rouge, Plant lectins: a composite of several distinct families of structurally and evolutionary related proteins with diverse biological roles, Crit. Rev. Plant Sci. (1998) 17: 645–662.

E.J.M. Van Damme, H. Kaku, F. Perini, I.J. Goldstein, B. Peeters, F. Yagi, B. Decock, W.J. Peumans, Biosynthesis, primary structure and molecular cloning of snowdrop (Galanthus nivalis L.) lectin, Eur. J. Biochem. (1991) 202: 23–30.

European. European Pharmacopoeia 2007.

G.M. Edelman, B.A. Cunningham, G.N. Reecke, J.W. Becker, M.W. Waxdal, J.M. Wang, Legume lectin structure, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1972) 69: 2580–2584.

Giry K, Genty M, Viana M, Wuthrich P, Chulia D. Multiphase versus single pot granulation process: influence of process and granulation parameters on granules properties Drug Dev Ind Pharm 2006;32:509-30.

Giry K, Viana M, Genty M, Louvet F, Wuthrich P, Chulia D. Comparison of single pot and multiphase granulation. Part 2: Effect of the drying process on granules manufactured in a single pot granulator and dried either in situ or in a fluid bed dryer Pharm Dev Technol 2009;14:149-58.

I.J. Goldstein, R.C. Hughes, M. Monsigny, T. Osawa, N. Sharon, What should be called a lectin? Nature (1980) 285: 66.

Javadzadeh Y, Shariati H, Movahed-Danesh E, Nokhodchi A. Effect of some commercial grades of microcrystalline cellulose on flowability, compressibility and dissolution profile of piroxicam liquisolid compacts Drug Dev Ind Pharm 2009;35:243-51.

Laija SN, Mahesh S, Smitha LS, Remani P (2010). Current Research Journal of Biological Sciences, 2(4): 232-237.

M. Vijayan, N. Chandra. Lectins. Curr. Opin. Struct. Biol. 9 (1999) 707–714.

Marczynski Z, Zgoda M, Jambor J. Application of silicified microcrystaline cellulose (Prosolv) as a polymer carrier of Epilobium parviflorum Schreb. extract in oral solid drug form Polim Med 2007;37:21-32.

Mohamed K, Ghorab A, Adeyeye C. High shear mixing granulation of ibuprofen and B-cyclodextrin: effects of process variables on ibuprofen dissolution AAPS PharmSciTech 2007;8:E1-E9.

N. Sharon, Carbohydrate-specific reagents and biological recognition molecules, J. Biol. Chem. (2007) 282: 2753–2764.

O.H.Lowry, Nira J. Rosebrough, A. Lewis Farr and Rose J. Randall. Protein measurement with the folin phenol reagent. Journal of Biological Chemistry, (1951) 193: 265-275.

Ove, Oliver, Julius (2003), Precipitation samples for SDS-PAGE by precipitation with trichloraetic acid (TCA) and alternative ways.

P.R. Jungblut, P. Jeno, S.G. Andersson and C. Dehio. Proteomics, (2004) 4: 3021–3033.

Peumans, W.J. , E.J. Van Damme, A. Barre, P. Rouge, Classification of plant lectins in families of structurally and evolutionary related proteins, Adv. Exp. Med. Biol. 491 (2001) 27–54.

Podczeck F, Jones BE, editor^editors. Pharmaceutical capsules London Pharmaceutical press 2004

Rajasekhar Baru Tulasi and Siva Kumar Nadimpalli (2002) Purification and characterization of a galactose-specific lectin from the stems and leaves of Dolichos lablab (Indian lablab beans)

Shah RB, Tawakkul MA, Khan MA. Comparative evaluation of flow for pharmaceutical powders and granules AAPS PharmSciTech 2008 9 250-58

Shanmugavel and Ajit Kumar Saxena (2005) Purification and Characterization of a Lectin from Arisaema tortuosum Schott Having in-vitro Anticancer Activity against Human Cancer Cell Lines

T.A. Rhomberg, O. Karlberg, T. Mini, U. Zimny-Arndt, U. Wickenberg, M. Rottgen,

V. Dhuna, K. Dhuna, J. Singh, A. K. Saxena, S. K. Agrawal, S. S. Kamboj. Isolation, purification and characterization of an N-acetyl-D-lactosamine binding mitogenic and anti-proliferative lectin from tubers of a cobra lily Arisaema utile Schott. Advances in Bioscience and Biotechnology, (2010) 1: 79-90.

U. Valentiner, S. Fabian, U. Schumacher, A.J. Leathem. The influence of dietary lectins on the cell proliferation of human breast cancer cell lines in vitro, Anticancer Res. 23 (2003) 1197–1206.

Vikram Dhuna, Jagmohan Singh Bains, Sukhdev Singh Kamboj, Jatinder Singh, W.J. Peumans, E.J. Van Damme, A. Barre, P. Rouge, Classification of plant lectins in families of structurally and evolutionary related proteins, Adv. Exp. Med. Biol. (2001) 491: 27–54.

Piller V., Piller F.Cartron J.P. Isolation and Characterization ofa n N-Acetylgalactosamine Specific Lectin from Salvia sclarea Seeds. J. of Biological Chemistry. (1986) 261, 30: 14069 – 14075.

Kianbakht S, Abasi B, Perham M, Hashem Dabaghian F. Antihyperlipidemic effects of Salvia officinalis L. leaf extract in patients with hyperlipidemia: a randomized doubleblind placebo-controlled clinical trial. Phytother Res. Apr 2011, 25(12):1849-53.

Rambler's Top100 Rambler's Top100 MedLinks - ??? ???????? ? ???????? Яндекс цитирования Ивлим.Ру: информация и развлечения Meddesk.ru - медицинская доска
бесплатных объявлений